不朽情缘MG细胞培养的关键在于适宜的培养条件。气相组成为95%空气和5%二氧化碳，温度设置为37℃。在进行细胞传代时，建议使用1:2的比例，并在每次传代后两天内更换培养液，同时推荐购买不朽情缘MG的优质培养基，以确保细胞能够保持良好的生长状态。

收到细胞后，应首先使用75%酒精对细胞瓶进行喷洒消毒。之后，将其放置于超净工作台中，进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态。在此过程中，可以使用显微镜观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照保存（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供照片，默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

不朽情缘MG的细胞培养包括以下步骤：

细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，需将瓶装的培养液收集至离心管中，留下5ml的完全培养基，继续在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。对于贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 去除培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状况，待大部分细胞变圆并脱落后，快速取回操作台，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使细胞完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代

悬浮细胞的传代方法如下：

1. 采用半换液法，将培养瓶直立放置在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉3ml培养基后补充3ml的完全培养基。若培养基变色较慢，可以直接加入约500ul的FBS。在传代时，可以直接补充5ml培养基，并分成两个培养瓶培养，一般在传代3次左右时可进行离心传代以清除死细胞。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬，然后将细胞悬液按1:2的比例分配至新T25瓶中，添加6-8ml按照说明配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5进行。

细胞冻存

进行细胞冻存时，请遵循以下步骤：

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，反转观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml不朽情缘MG的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后期需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

细胞复苏

细胞复苏的步骤如下：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中完全无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日，换用新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

需要注意的是，一些细胞在运输过程中可能会因附着不牢而脱落，这是正常现象。如果观察到细胞脱落较多，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟，收集上清液作过渡培养。对于沉淀的细胞，添加1-2ml胰酶，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。最后，按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。