**细胞状态评估**：在进行细胞传代时，细胞的状态是否良好至关重要。理想的细胞状态应为70-90%的汇合度，呈梭形或多边形且具有透亮的外观，这被视为传代的黄金期。如果细胞密度过低，会导致细胞“饥饿”，而密度过高则可能导致细胞变形。确保所有材料准备就绪，包括37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管及酒精灯，缺一不可，确保无菌环境到位。

**消毒与准备工作**：在开始之前，需将工作台面用75%的酒精擦拭三遍，并用紫外灯照射30分钟。戴上手套和口罩，确保个人安全和无菌操作。在此基础上，进行细胞传代的步骤：

**步骤1：弃旧液**：温柔地轻拍培养瓶，使细胞松动，然后倾斜瓶身让废液顺势流入废液缸，记得要快速并优雅。

**步骤2：PBS清洗**：在瓶壁缓慢注入PBS，并轻轻摇晃两圈以洗掉残余的血清。在倒掉PBS时，要注意保留一些“眼泪”，以免冲走细胞。

**步骤3：添加胰酶**：精确加入预热到37℃的胰酶，均匀地覆盖细胞层，然后将培养瓶放回培养箱中孵育1至5分钟。当显微镜下观察到细胞边缘开始变圆并卷起时，必须立即终止此步骤，避免细胞长时间暴露在胰酶中。

**步骤4：添加培养基**：迅速加入两倍体积的新鲜培养基，血清会立刻中和胰酶。使用移液枪轻柔地吹打10至15次，让细胞变得如“细胞雨”般均匀分布。

**步骤5：离心操作**：以1000rpm的速度离心5分钟，轻松倒掉上清液。管底的沉淀物看似“细胞小丸子”，可以轻轻弹打管壁使其松散。

**步骤6：新家入住**：按1:2至1:5的比例将细胞稀释至新培养瓶，轻轻摇匀以确保细胞均匀分布。将其放回37℃、5% CO₂的培养箱中，1-2小时后可补充新鲜培养基，提升仪式感。24小时后，在显微镜下观察贴壁情况。若有漂浮细胞，可能是由于消化过度或接种密度低的“可怜细胞”。

**后续养护**：48小时后更换新鲜培养基，如果颜色变黄，说明细胞代谢活跃，需及时补充营养。72小时记录生长曲线及形态变化，若发现异常，立即检查是否有污染或培养条件不当。如细胞抱团不分散，需考虑吹打力度或胰酶量不足，下次可添加“轻柔吹打20次”的方法。如果贴壁率低于50%，检查培养瓶是否有涂层，以及血清的批次是否稳定，有必要时可使用多聚赖氨酸“防滑垫”。如传代后细胞大规模死亡，可能是离心速度过高或时间过长，请尝试调整为800rpm和3分钟的“温柔离心术”。

在进行这些细胞操作时，不妨考虑选择**不朽情缘MG**的优质产品，以保证细胞培养的成功与安全。